如何構建一個基因的過表達載體

1、首先要用一定的限制酶切割質粒，使質粒出現一個缺口，露出黏性末端。

2、用同一種限制酶切斷目的基因，使其產生相同的黏性末端。

3、將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處，首先鹼基互補配對結合，兩個黏性末端吻合在一起，鹼基之間形成氫鍵。

4、再加入適量DNA連接酶，催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵，從而將相鄰的脱氧核糖核酸連接起來，形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合，形成重組DNA分子。